摘要：利用高效液相示差折光分析法測(cè)定D-氨基葡萄糖鹽酸鹽中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖，方法采用Alltech C18柱(250× 4.6 mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-醋酸鹽緩沖液(3∶97)，流速1 mL /min,柱溫40℃ ，進(jìn)樣量20μL.N-乙酰-D-氨基葡萄糖在4.18～ 1 079.33μg mL范圍內(nèi)呈顯著的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9993，方法的加標(biāo)回收率98.78%，檢出限4.18μg mL。

關(guān)鍵詞:HPLC，D-氨基葡萄糖鹽酸鹽， N-乙酰-D-氨基葡萄糖。

D-氨基葡萄糖鹽酸鹽(C6H11O5NH2·HCl)(D-Glucosamine Hydrochloride)，是一種海洋生物制劑,在人體內(nèi)具有重要的生理意義：參與肝腎解毒，具有抗炎保肝等作用，在醫(yī)藥上用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥和胃潰瘍疾病^[1]，同時(shí)也是食品甜味劑,抗氧劑,又是雙歧桿菌培養(yǎng)基的主要成分之一；在制備D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的過程中,容易產(chǎn)生雜質(zhì)N-乙酰-D-氨基葡萄糖，所以為了對(duì)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的質(zhì)量進(jìn)行控制，建立了檢測(cè)N-乙酰-D-氨基葡萄糖雜質(zhì)的方法。目前已有HPLC示差折光分析法測(cè)定糖類物質(zhì)的文獻(xiàn)^{[2～ 3]}，但還未見測(cè)定N-乙酰-D-氨基葡萄糖的報(bào)道，由于D-氨基葡萄糖鹽酸鹽和N-乙酰-D-氨基葡萄糖均無(wú)紫外吸收，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室情況,本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-RID法檢測(cè)，該方法快速、靈敏,結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的純度檢測(cè)提供了依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與設(shè)備

日本島津LC-6A型高效液相色譜儀；RID-6A示差折光檢測(cè)器；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 試劑

乙腈（色譜純）；水為超純水；N-乙酰-D-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品。

醋酸鹽緩沖液：稱取0.80g醋酸鈉和0.98g正庚烷磺酸鈉，加入970ml水溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)PH至4.5。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

C18色譜準(zhǔn)（250x4.6mm,5μm），流動(dòng)相為乙腈-醋酸鹽緩沖液（3：97），流速1ml/min，柱溫：40℃，進(jìn)樣體積為20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精取122.88 mg N-乙酰-D-氨基葡萄糖于25 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻得4.915 2 mg/mL。

2.2.2 樣品溶液的制備

稱取50mg樣品，置于25ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，超聲5min，過0.45μm濾膜，即得。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（a)，空白溶液(b)，樣品溶液(c)，各20μL注入色譜儀，記錄色譜圖如下：